产品分类
CD274 Knockout A20 Cell Line
- 产品描述
- 细胞复苏
- 细胞传代
- 细胞冻存
- 抗体验证结果
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- 商品名称: CD274 Knockout A20 Cell Line
- 商品编号: LM02176016496
- Gene Symbol: Cd274, B7h1, Pdcd1l1, Pdcd1lg1, Pdl1
- Ensembl ID: ENSMUSG00000016496
- Uniprot ID: Q9EP73
- 宿主细胞 / 类型: A20/小鼠 B 细胞淋巴瘤细胞
- NCBI Gene ID: 60533
- 规格: 1×10^6 cells/ 冻存管
- 筛选标记: N/A
- 生长特性: 悬浮细胞,淋巴母细胞样
- 培养条件: 37℃,5% CO2 的培养箱，1/2 到 1/4 传代
- 倍增时间: ~24-48 hours
- 生长培养基: 1640+10%FBS+1%双抗+1%β-巯基乙醇
- 参考换液频率: 2-3次/周
- 支原体检测结果: 阴性
- 敲除效率（Sanger测序）: 100%
- 蛋白质组验证结果: 已完成蛋白水平验证
- 抗体货号: 添加中
- 目标基因介绍: Plays a critical role in induction and maintenance of immune tolerance to self (PubMed:11238124). As a ligand for the inhibitory receptor PDCD1/PD-1, modulates the activation threshold of T-cells and limits T-cell effector response (PubMed:11238124). Through a yet unknown activating receptor, may costimulate T-cell subsets that predominantly produce interleukin-10 (IL10) (PubMed:11015443, PubMed:12719480).3 publications The PDCD1-mediated inhibitory pathway is exploited by tumors to attenuate anti-tumor immunity and escape destruction by the immune system, thereby facilitating tumor survival (PubMed:12218188, PubMed:27281199). The interaction with PDCD1/PD-1 inhibits cytotoxic T lymphocytes (CTLs) effector function (PubMed:12218188). The blockage of the PDCD1-mediated pathway results in the reversal of the exhausted T-cell phenotype and the normalization of the anti-tumor response, providing a rationale for cancer immunotherapy (PubMed:12218188).
- 细胞开发路径: 采用CRISPR-RNP方法生成稳定KO Cell line；Sanger 测序结果显示KO Cell line敲除效率100%。
- 应用: 高敲除效率的基因敲除细胞系（KO Cell Line），特别适用于初步功能分析、复杂疾病模型的开发、精准药物筛选以及广泛的基因发现研究。
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01. 在 37℃水浴中预热完全培养基。
02. 将冻存管在 37℃水浴中解冻 1-2 分钟。
03. 将冻存管转移到生物安全柜中，并用 70% 乙醇擦拭表面。
04. 拧开冻存管管盖，将细胞悬液轻轻转移到含有 9mL 完全培养基的无菌离心管中。
05. 在室温下以 125g 离心 5-7 分钟，弃上清。
06. 用 5mL 的完整培养基重悬细胞沉淀，将细胞悬液转移到 T25 培养瓶中。
07. 将细胞转移到 37℃,5% CO2 的培养箱中培养。
08. 参考传代比例：1/2 到 1/4 传代，2-3 天长满。
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01. 待培养瓶中细胞汇合度至 80%-90% 以上，可进行细胞传代。
02. 将培养基、PBS、胰酶（0.25%Trypsin_EDTA Gibco 25200-056） 等从 4℃冰箱中拿出， 置于 37℃水浴中温度接近 37℃时取出并在瓶子表面喷洒 75% 酒精后置于生物安全柜中。03. 从培养箱中取出待传代的培养瓶，瓶身喷洒 75% 酒精后置于生物安全柜中。
04. 为避免冲散细胞，沿培养瓶上壁 PBS 润洗细胞，清洗细胞后弃去，T25 加 2mL。
05. 加入对应体积的胰酶（T75 加 1.5mL， T25 加 0.5mL） ，并轻轻晃动瓶身使胰酶平铺满细胞 底部。可根据实际情况适当增加或减少用量。约 1-2min 后大部分细胞脱落时，加入对应体积的完全培养基终止消化，并用 5mL 移液管轻轻吹打至细胞全部脱落。
06. 将细胞悬液转移至 15mL 离心管，悬液 300g 离心 5min，弃上清。
07. 移取 5mL 完全培养基重悬细胞，按需求调整接种比例，并补充培养瓶中完全培养基，T75 加至 13-15mL，T25 加至 5mL，加 1% 双抗。
08. 盖上瓶盖拧紧后轻轻晃动瓶身，使细胞混合均匀后置于 37℃,5% CO2 培养箱中。
-
01. 准备冻存液，并提前预冷。
02. 确保待冻存的细胞满足冻存要求，用显微镜检查以下状态：健康的外观及形态特征、所处生 长周期（对数晚期）、无污染或衰退迹象。
03. 对细胞进行消化及离心处理（具体步骤参考传代培养流程）
04. 按照每管 1mL 的量添加冻存液重悬细胞，吹打均匀后分装至冻存管。
05. 将细胞放在程序降温盒中，在 -80℃冰箱中冷冻。
06. 后续将细胞转移到液氮罐中，以便长期储存。
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抗体验证中
产品类型： 基因敲除细胞系（蛋白水平已验证）
细胞系信息
Gene Symbol
Cd274, B7h1, Pdcd1l1, Pdcd1lg1, Pdl1
NCBI Gene ID
60533
Ensembl ID
ENSMUSG00000016496
Uniprot ID
Q9EP73
筛选标记
N/A
宿主细胞 / 类型
A20/小鼠 B 细胞淋巴瘤细胞
规格
1×10^6 cells/ 冻存管
生长培养基
1640+10%FBS+1%双抗+1%β-巯基乙醇
生长特性
悬浮细胞,淋巴母细胞样
培养条件
37℃,5% CO2 的培养箱，1/2 到 1/4 传代
倍增时间
~24-48 hours
参考换液频率
2-3次/周
支原体检测结果
阴性
敲除验证
敲除效率（Sanger测序）
100%
蛋白质组验证结果
已完成蛋白水平验证
抗体货号
添加中
抗体验证结果
抗体验证中
细胞系说明
目标基因介绍
Plays a critical role in induction and maintenance of immune tolerance to self (PubMed:11238124). As a ligand for the inhibitory receptor PDCD1/PD-1, modulates the activation threshold of T-cells and limits T-cell effector response (PubMed:11238124). Through a yet unknown activating receptor, may costimulate T-cell subsets that predominantly produce interleukin-10 (IL10) (PubMed:11015443, PubMed:12719480).3 publications The PDCD1-mediated inhibitory pathway is exploited by tumors to attenuate anti-tumor immunity and escape destruction by the immune system, thereby facilitating tumor survival (PubMed:12218188, PubMed:27281199). The interaction with PDCD1/PD-1 inhibits cytotoxic T lymphocytes (CTLs) effector function (PubMed:12218188). The blockage of the PDCD1-mediated pathway results in the reversal of the exhausted T-cell phenotype and the normalization of the anti-tumor response, providing a rationale for cancer immunotherapy (PubMed:12218188).
细胞开发路径
采用CRISPR-RNP方法生成稳定KO Cell line；Sanger 测序结果显示KO Cell line敲除效率100%。
应用
高敲除效率的基因敲除细胞系（KO Cell Line），特别适用于初步功能分析、复杂疾病模型的开发、精准药物筛选以及广泛的基因发现研究。
细胞培养说明
细胞复苏
01. 在 37℃水浴中预热完全培养基。
02. 将冻存管在 37℃水浴中解冻 1-2 分钟。
03. 将冻存管转移到生物安全柜中，并用 70% 乙醇擦拭表面。
04. 拧开冻存管管盖，将细胞悬液轻轻转移到含有 9mL 完全培养基的无菌离心管中。
05. 在室温下以 125g 离心 5-7 分钟，弃上清。
06. 用 5mL 的完整培养基重悬细胞沉淀，将细胞悬液转移到 T25 培养瓶中。
07. 将细胞转移到 37℃,5% CO2 的培养箱中培养。
08. 参考传代比例：1/2 到 1/4 传代，2-3 天长满。
细胞传代
01. 待培养瓶中细胞汇合度至 80%-90% 以上，可进行细胞传代。
02. 将培养基、PBS、胰酶（0.25%Trypsin_EDTA Gibco 25200-056） 等从 4℃冰箱中拿出， 置于 37℃水浴中温度接近 37℃时取出并在瓶子表面喷洒 75% 酒精后置于生物安全柜中。
03. 从培养箱中取出待传代的培养瓶，瓶身喷洒 75% 酒精后置于生物安全柜中。
04. 为避免冲散细胞，沿培养瓶上壁 PBS 润洗细胞，清洗细胞后弃去，T25 加 2mL。
05. 加入对应体积的胰酶（T75 加 1.5mL， T25 加 0.5mL） ，并轻轻晃动瓶身使胰酶平铺满细胞 底部。可根据实际情况适当增加或减少用量。约 1-2min 后大部分细胞脱落时，加入对应体积的完全培养基终止消化，并用 5mL 移液管轻轻吹打至细胞全部脱落。
06. 将细胞悬液转移至 15mL 离心管，悬液 300g 离心 5min，弃上清。
07. 移取 5mL 完全培养基重悬细胞，按需求调整接种比例，并补充培养瓶中完全培养基，T75 加至 13-15mL，T25 加至 5mL，加 1% 双抗。
08. 盖上瓶盖拧紧后轻轻晃动瓶身，使细胞混合均匀后置于 37℃,5% CO2 培养箱中。
细胞冻存
01. 准备冻存液，并提前预冷。
02. 确保待冻存的细胞满足冻存要求，用显微镜检查以下状态：健康的外观及形态特征、所处生 长周期（对数晚期）、无污染或衰退迹象。
03. 对细胞进行消化及离心处理（具体步骤参考传代培养流程）
04. 按照每管 1mL 的量添加冻存液重悬细胞，吹打均匀后分装至冻存管。
05. 将细胞放在程序降温盒中，在 -80℃冰箱中冷冻。
06. 后续将细胞转移到液氮罐中，以便长期储存。