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基因敲除细胞池(KO Cell Pool)是通过CRISPR/Cas9 RNP基因编辑法将靶基因对应的多条化学合成的sgRNA (single-guide RNA)与Cas9蛋白体外混合形成核糖核蛋白复合物(Ribonucleoprotein,即RNP),通过电转化的方式将RNP递送到细胞体内,无需通过传统的慢病毒/质粒法的抗性筛选过程,即可获得高效、稳定遗传的基因敲除细胞池。由于RNP在细胞内72h完成基因组编辑后就会被降解,不引入外源序列,尽可能保持细胞表型,是目前脱靶效应最低的方式,可有效避免病毒基因组随机整合,而影响后续功能性实验,避免传统方法中Cas9和sgRNA持续表达造成细胞基因组不稳定及高脱靶风险。
大量构建KO细胞池,其制备时间相比细胞系更短,成本更低,可以快速获得基因功能验证结果;KO Cell Pool通常包含多个不同的敲除细胞基因型,这种多样性更接近自然状态下细胞群体的遗传异质性。可以提供更全面的数据,帮助研究者理解基因敲除对细胞群体的影响,而不仅仅是单一细胞系的影响;对于研究复杂的生物学问题,例如多基因互作、信号通路、药物靶点筛选等,使用KO Cell Pool更为合适,KO Cell Pool显示更高的稳定性和可重复性,其多样性确保了不同类型的敲除细胞可以模拟复杂的生物过程,提供更接近生理状态的实验条件。
基因敲除细胞池
重置
重置
重置
A1BG Knockout NCI-H1703 Cell Pool
A2M Knockout HEK293T Cell Pool